Expresión de la proteína B8Y674 Candidatus Liberibacter asiaticus mediante electroforesis en geles de poliacrilamida (page) y dot blot

El Huanglongbing (HLB), es una de las enfermedades más devastadoras los cítricos a nivel mundial y representa seria amenaza para la citricultura mexicana. agente causal bacteria incultivable que pertenece al género Candidatus Liberibacter spp. afecta todas especies cítricos, especialmente agrios. Para su detección, se emplean técnicas moleculares como reacción en cadena polimerasa (QT-PCR), serológicas espectrofotométricas. objetivo este trabajo fue expresar proteína recombinante BY8743 mediante electroforesis geles poliacrilamida 12 % (PAGE) Dot Blot. obtener secuencia acudió base datos del National Center Biotechnology Information (NCBI). Una vez obtenida secuencia, revisó modificó el marco lectura abierto, por sus siglas ingles Open Reading Frame (ORF) programa CLC Main Workbench 7 procedió sintetizar vector pET22b+, también verificó codón inicio termino acoplado vector. transformación usaron células comerciales One Shot® TOP10 Chemically Competent (InvitrogenTM), posteriormente fueron subclonadas E. coli BL21. Se realizaron minipreparaciones usando un método lisis alcalina además realizó cinética crecimiento, observando tres horas alcanza fase estacionaria. aplicaron concentraciones 0.5, 0.8 1 mM inductor metabólico isopropil-β-D-1-tiogalactopiranósido (IPTG) mejor concentración mM, ya cuatro después aplicación pudo visualizar sobreexpresada 38 kDa. Cuando Blot obtuvieron resultados sobresalientes inmunoexpresión utilizado diferencia control sin transfectar.